Prácticas laboratorio

Práctica 1: Observación de bacterias al microscopio
Fecha: 23 Septiembre 2009   Archivada en Prácticas laboratorio 
1-OBJETIVOS

Realizar una tinción simple de bacterias procedentes de de un yogur, vinagre o sarro dental.
Realizar dos tipos de fijaciones bacterianas y saber en qué casos se recomienda una u otra.
Observar la morfología bacteriana y aprender a distinguir los distintos tipos de agrupaciones que existen.
Practicar con el microscopio al máximo aumento y con el correcto empleo del aceite de inmersión.

2-MATERIAL
Mechero Bunsen o de alcohol
Asa de siembra o aguja enmangada
Pinzas
Portaobjetos
Muestras bacterianas de origen natural: yogur, vinagre, sarro dental, suelo, etc.
Colorantes para tinción: Azul de metileno al 1%
Microscopio y aceite de inmersión.
Cada grupo elegirá que tipo de muestra va a preparar para la observación.
A continuación se detalla el procedimiento para cada caso.

3-PASOS A SEGUIR

A) BACTERIAS DEL YOGUR:

El yogur es un producto lácteo producido por la fermentación natural de la leche. A escala industrial se realiza la fermentación añadiendo a la leche dosis del 3-4% de una asociación de dos cepas bacterianas: el Streptococcus termophilus, poco productor de ácido, pero muy aromático, y el Lactobacillus bulgaricus, muy acidificante.
En esta preparación se podrán, por tanto, observar dos morfologías bacterianas distintas (cocos y bacilos) y un tipo de agrupación (estreptococos, cocos en cadenas arrosariadas). Además, el tamaño del lactobacilo (unos 30µm de longitud) facilita la observación aunque no se tenga mucha práctica con el enfoque del microscopio.

PROCEDIMIENTO:
1. Realizar el frotis disolviendo una mínima porción de yogur en una pequeña gota de agua.
2. Fijar con metanol para eliminar parte de la grasa.
3. Teñir con un colorante cualquiera de los arriba indicados durante 1-2 minutos. Observar al máximo aumento del microscopio

B) BACTERIAS DEL VINAGRE
El vinagre es una solución acuosa rica en ácido acético resultante de la fermentación espontánea del vino o de bebidas alcohólicas de baja graduación. La acetificación del vino es producida por bacterias aeróbicas del ácido acético, principalmente Acetobacter aceti, aunque también Gluconobacter. Se trata de bacilos rectos con flagelos polares.

PROCEDIMIENTO:
Tomar con una aguja enmangada una pequeña porción de madre de vinagre natural o de la telilla que se forma sobre la superficie de los vinos agriado.
Extender la muestra en el portaobjetos con una gota de agua y hacer el frotis.
Dejar secar y fijar con calor.
Teñir 2-3 minutos, lavar el exceso de colorante y secar
C) BACTERIAS DEL SARRO DENTAL
El sarro dental es un depósito consistente y adherente localizado sobre el esmalte de los dientes. Está constituido principalmente por restos proteicos, sales minerales y bacterias junto con sus productos metabólicos.

La flora bacteriana de la cavidad bucal es muy variable dependiendo de las condiciones que se den en el momento de hacer la preparación, pero suelen abundar bacterias saprófitas, pudiéndose observar gran variedad de morfologías: espiroquetas, cocobacilos, diplococos y bacilos.

PROCEDIMIENTO:
Con una aguja enmangada tomar una pequeña porción de sarro dental y disolverla en una gota de agua sobre el portaobjetos.
Dejar secar y fijar con calor.
Teñir 2-3 minutos, lavar el exceso de colorante y secar.




PRACTICA 2: Observación células raíz de cebolla en mitosis



OBJETIVOS


El objetivo fundamental de esta práctica es observar las distintas fases de la Mitosis en un tejido vegetal.

1. Identificar las distintas fases de la Mitosis.

2. Realizar una tinción específica de los cromosomas.

FUNDAMENTO TEÓRICO

La Mitosis es un proceso de división celular en el cual se obtienen dos células con la misma información genética que la célula progenitora (célula madre).

Este proceso está dividido en diferentes fases:

INTERFASE

Es el estado en el que se encuentra la célula cuando no está en el proceso de división.

Durante este período la célula duplica su material genético, crece y prepara las estructuras y proteínas necesarias para llevar a cabo la Mitosis.

PROFASE

Se trata de la primera fase de la Mitosis.

Durante esta fase el centríolo de la célula se duplica cada uno de ellos se dirige hacia un polo de la célula. La membrana nuclear se desintegra Los cromosomas se condensan y hacen visibles sus estructuras dobles.

METAFASE

Se trata de la segunda fase de la Mitosis.

Durante esta fase los cromosomas se dirigen hacia el centro de la célula. Aparece el huso plasmático.

ANAFASE

Se trata de la tercera fase de Mitosis.

Las cromátidas son divididas y dirigidas hacia los polos por el huso plasmático.


TELOFASE

Se trata de la última fase de la Mitosis.

Los cromosomas llegan a los polos de la célula, creándose una membrana nuclear alrededor de ellos. Estos se dividen y ya no se pueden distinguir entre sí. La célula empieza a mostrar una hendidura en la membrana celular, indicando su pronta división.

CITOCINESIS

En este período el material citoplasmático de la célula se divide de forma idéntica entre las dos células hijas. La membrana celular se divide, y resultan dos células genéticamente idénticas y con la mitad del material citoplasmático de la célula madre.

MATERIAL NECESARIO

 Material general de laboratorio
• Portaobjetos

• Cubreobjetos.

• Mechero Bunsen.

• Pinzas.

• Microscopio.

• Dos pipetas Pasteur.

• Dos tetinas.

• Tijeras.

 Productos químicos y reactivos

• Cebolla.

• Orceína acética A.

• Orceína acética B.


PROCEDIMIENTO

Para realizar esta práctica necesitas poner una cebolla en un recipiente con agua, dejando las raíces sumergidas en la misma, durante dos o tres días. Al paso de este tiempo:

1. Corta con las tijeras unos 2-3 mm de un extremo de la raíz de la cebolla y colócalo en un vidrio de reloj.

2. Añade 2 -3 ml de orceína acética A. La orceína A reblandece las membranas celulares.

3. Calienta suavemente la preparación encima de la llama del mechero Bunsen, durante unos 8 minutos, procurando que no hierva, hasta la emisión de vapores tenues.

4. Con las pinzas toma uno de los extremos de las raicillas y colócalo sobre un porta objetos. Añade orceína acética B, y deja actuar durante 1 minuto.

5. Coloca un cubreobjetos con mucho cuidado sobre la preparación y con el mango de una aguja enmangada da unos golpecitos sobre el cubre de modo que la raíz quede extendida.

6. Pon con cuidado el pulgar en la zona del cubreobjetos, interponiendo un papel de filtro, y haz una suave presión, evitando que el cubre resbale, para que las células se rompan; este proceso se denomina Squash. Si la preparación está bien asentada no hay peligro de rotura por mucha presión que se realice.

7. Coloca la muestra en el microscopio y obsérvala con un objetivo de poco aumento. Vete moviendo la preparación para ver las células en las distintas fases.

8. Repite la observación con los objetivos de mayor aumento.


INFORME DE LABORATORIO


Responde a estas preguntas:

1. Compara lo que has observado con las fotos del fundamento teórico. ¿Qué fases has logrado reconocer?
2. Las cebollas tienen ocho cromosomas en su núcleo ¿Cuántos cromosomas tenían las células que has observado? ¿Cómo están los cromosomas?
3. Comprueba si se puede utilizar cualquier trozo de cebolla para ver los cromosomas. Para ello haz lo mismo con otro tejido de cebolla.
4. ¿Qué ves? ¿Se distinguen los cromosomas? ¿Por qué?
5. Identifica las fases señaladas con un círculo.